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• 1、质粒裂解系统

质粒裂解系统

1、抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH15）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。

2、向离心管中加入250l Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4~6次，获得澄清的裂解液；（剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度） 向离心管中加入350l Buffer N3， 立即温和地上下颠倒混匀4~6次，此时出现白色絮状沉淀。

3、该实验方案的目的是从少量（1~2mL）细菌培养物中分离质粒DNA。DNA产量为100ng~5μg，这取决于质粒的拷贝数。少量的DNA作为体外酶促反应的底物或者模板是足够的，但是，如果质粒DNA用于测序则需要进一步纯化。